В настоящее время активное табакокурение – серьёзная проблема человечества. По количеству курящих людей Россия входит в пятерку стран [1]. Проблема влияния табакокурения на организм человека, его умственные способности и последствия актуальна до сих пор. Наиболее опасным осложнением курения является рак полости рта. Данное заболевание является шестым по распространенности злокачественным новообразованием и одной из причин смерти во всем мире [2-4]. Во всем мире ежегодно диагностируется более 400 000 новых случаев рака ротовой полости [4, 5]. Это в значительной степени предотвратимый рак, поскольку большинство различных выявленных факторов риска, таких как курение, употребление алкоголя, представляют собой поведение, которое увеличивает вероятность заболевания [3]. Учитывая высокую смертность, крайне важна ранняя диагностика. Один из самых известных и эффективных методов молекулярной диагностики заболеваний, получивший в последние годы широкое применение является иммуногистохимия. Однако, прогностическая возможность метода несколько ограничена из-за инвазивности доступа для получения материала для исследования. В настоящее время создаются и изучаются неинвазивные методы, одним из которых является прижизненное получение и изучение буккального эпителия (БЭ) [6-9]. Взятие материала осуществляется неинвазивным путем – с внутренней поверхности щеки. Кроме того, данный объект исследования может быть применим для прижизненной диагностики общественно значимых заболеваний. Преимущество цитодиагностики мазков БЭ обусловлено сравнительной простотой, быстротой и дешевизной, а также отсутствием необходимости в специальном оборудовании для культивирования клеток. БЭ является «зеркалом», способным отражать различные изменения в организме [9]. Поэтому изучение цитологических особенностей БЭ при табакокурении может помочь в диагностике и верификации осложнений данной вредной привычки.
Цель исследования: изучить цитологические изменения БЭ при табакокурении у подростков и молодых взрослых.
Материал и методы исследования
Исследование включало следующие этапы: анкетирование и микроскопирование клеток БЭ у курящих и некурящих подростков и молодых взрослых.
Опросник включал 4 вопроса:
1. Знаете ли вы, что курение влияет на здоровье человека? Как? На какие органы влияет табачный дым?
2. Курите ли Вы?
3. Нравится ли вам курить? (Для тех кто ответил утвердительно на вопрос 2).
4. Хототе ли Вы получать дополнительную информацию о влиянии курения на организм человека?
5. Как вы считаете, провоцирует ли курение реклама табачных изделий в СМИ, курение героев сериалов и фильмов?
6. Имеет ли смысл борьба с курением среди студентов и школьников?
7. Во многих странах вводят налог на табачные изделия, как вы считаете, сможет ли данная мера, повлиять на количество курящих людей в стране?
8. Курят ли те, кто постоянно Вас окружает (одногруппники, соседи по общежитию)
В анкетировании приняли участие 200 человек (учащиеся 8х -11х классов и студенты 1-3 курса Воронежской и Белгородской области).
Для изучения клеток БЭ с помощью специального шпателя со слизистой оболочки поверхности щеки проводили забор материала в одно и то же время суток. Изготавливали нативные препараты. Для их окраски применяли гематоксилин-эозин. Объекты изучали с помощью микроскопа OLYMPUS CX21, фотографировали и получали изображения (Motic Images Plus 2.0).
В исследовании участвовало 24 студента 3 курса мужского пола зрелого возраста (19-21 лет) без соматических и психических патологий. Студенты разделены на 2 группы: первая группа состояла из 12 обучающиеся, которые выкуривают 5-7 сигарет в сутки со стажем курения 2-3 года, а во вторую – 12 студентов, без вредных привычек, в том числе, и курения (контрольная группа).
Результаты исследования и их обсуждение
При проведении опроса оценено отношение школьников (8-х – 11-х классов) и студентов (1-3 курса) Белгородской и Воронежской областях к курению. Результаты приведены на рисунке 1.
Рис. 1. Результаты опроса
Рис. 2. Количество курящих респондентов в разных возрастных группах
Опрос показал, что 85% респондентов знают о том, как влияет курение на организм человека, но только 15% из них могут сказать, как и на какие органы. 80% респондентов ответили, что они не курят. Однако 20% опрошенных ответили, что курят. Это в основном студенты. 75% опрашиваемых хотят получить дополнительную информацию о влиянии курения на организм человека.
При распределении курящих в зависимости от возрастной группы, оказалось, что максимальный % курильщиков в 10 классе и на 2-3 курсе. Результаты на рисунке 2.
На следующем этапе проведено сравнение эпителиоцитов курящих студентов с некурящими Сбор буккальных клеток представляет собой простой, безболезненный и наименее инвазивный метод, доступный для измерения повреждений ДНК у людей, которые могут быть вызваны воздействием генотоксинов окружающей среды, таких как радиация, химические вещества, дефицит микронутриентов и факторы образа жизни (например, алкоголь, курение и стресс), которые прямо или косвенно нарушают целостность макромолекул [2]. Микроскопические изменения, которые возникают ранее в слизистой оболочке щеки, включают микроядра и другие ядерные аномалии, такие как кариорексис, кариолизис, пикноз, двуядерность, конденсированные ядра, гиперхроматизм, заметные ядрышки, сломанные ядра яйцеклеток, ядерно-цитоплазматическое соотношение и неправильные границы ядер [2, 9, 10].
Результаты исследования показали, что клетки у лиц контрольной группы лежат отдельно друг от друга, цитоплазма окрасилась в розовый цвет. Эпителиоциты поверхностного слоя полигональной формы с мелкими ядрами. Эпителиоциты шиповатого слоя крупные, полигональной формы, ядро овальной формы. Роговые чешуйки встречаются редко. Клеток базального слоя почти не выявлено.
При изучении мазка с внутренней поверхности щеки у курящих студентов, выявлены группы БЭ в поле зрения мазка (рис. 3 а), с наложением друг на друга. Часто лейкоциты занимают большую часть поля зрения мазка, по сравнению с контролем они присутствуют в существенно большем количестве (рис. 3 б).
Также во второй группе студентов в исследуемом материале присутствуют клетки БЭ с протрузией ядра типа «язык» и «разбитое яйцо» (рис. 3 в, г). Нередко в мазке встречаются микроядра и клеточный диморфизм (рис. 3 д).
В клетках промежуточного слоя наблюдается два ядра, часто встречается насечки (рис. 3 е). Результаты многих авторов показывают, что БЭ может подвергаться функциональным изменениям при нарушении внутреннего состояния организма из-за того, что он обладает чувствительностью к многим воздействиям экзогенного и эндогенного характера [2, 9, 11]. Микроядра и другие ядерные аномалии чаще встречаются у курильщиков [2, 9, 10].
Рис. 3. Клетки БЭ у курящих студентов Воронежской области Стрелками показано: а) группа эпителиоцитов, которые плотно накладываются друг на друга; б) скопление лейкоцитов между роговыми чешуйками; в) протрузия ядра типа «язык»; г) протрузия ядра типа «разбитое яйцо»; д) микроядро; е) клеточный диморфизм; ж) насечка; з) двуядерная клетка. Увеличение х 400
Употребление табака (как при курении, так и при жевании) оказывает неблагоприятное воздействие на щечную ткань. Основное содержание табака – никотин, смола и полициклические углеводороды. Одной из основных причин токсичности табака являются активные формы кислорода. Оценка токсичности табака с различными формами табака показала, что содержание смол и никотина оказывает генотоксическое действие на буккальные клетки, проявляющееся различными ядерными аномалиями, которые могут быть использованы в качестве биомаркеров потенциально злокачественных заболеваний [2]. В нашем исследовании мы также обнаружили, что бинуклеация и кариорексис чаще отмечалась у курильщиков по сравнению с некурящими.
Выводы
1. Установлено, что 15% опрошенных респондентов курят. Это в основном студенты. 75% опрашиваемых хотят получить дополнительную информацию о влиянии курения на организм человека.
2. В эпителиоцитах курящих студентов по сравнению с контрольной группой, выявлено появление групп клеток, микрoядер, протрузий ядер типа «язык» и «разбитое яйцо», увеличение количества лейкоцитов в мазке, ядер с насечкой.
3. Можно предположить, что появление изменений в буккальном эпителии у курящих студентов, по сравнению с контрольной группой, может свидетельствовать о воспалительном процессе в слизистой оболочке ротовой полости.